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Tris缓冲液的优缺点配置方法以及应用

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关键词:Tris缓冲液 配置方法 应用

Tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷; 氨基丁三醇;缓血酸胺;2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水,微溶于乙酸乙酯、苯,不溶于乙醚、四氯化碳,对铜、铝有腐蚀作用,有刺激性的化学物质。

Tris有很高的缓冲能力,在水中溶解度高,对很多酶反应是惰性的,使Tris成为用于许多生化目的非常满意的缓冲液。一般用于稳定反应体系的pH,在pH7.5-9.0之间有较强的缓冲能力。

                          

Tris缓冲液的优点

① 因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;

② 对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

 

Tris缓冲液的缺点

① 缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1;

② 温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,△pKa/℃=-0.031,例如:4℃时缓冲液的pH=8.4,则37℃时的pH=7.4,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃;

③ 易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封;

④ 此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

 

Tris缓冲液配置方法

配制Tris-HCl缓冲液的方法有两种:分别配制0.05 mol/L Tris和0.05 mol/L HCl溶液,然后按常用表中所列体积混合即可。但是由于标准浓度的稀盐酸不易配制,所以常用另一种方法:以配置1 L 0.1 mol/L的Tris-HCl缓冲液为例:先称12.11 g Tris碱溶于950 mL~970 mL 去离子水中,边搅拌边滴加4 N HCl,用pH计测定溶液pH值至所需的pH值,然后再加水补足到1 L。

 

Tris缓冲液pH范围

Tris缓冲液在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,它的常用有效pH范围是在“中性”范围,如:

Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5

Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0

 

Tris缓冲溶液的应用

在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系稳定pH值;在凝胶中使用Tris-HCl缓冲体系稳定pH值;被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂;Tris缓冲液的低离子强度特点还可用于线虫的中间纤维的形成;在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”,可用于DNA的稳定和存储;将调节pH值的酸溶液换成乙酸,获得“TAE缓冲液”,换成硼酸可获得TBE缓冲液。这两种缓冲液常用于核酸电泳实验中。

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